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Polysciences 24765-1试剂

Polysciences 24765-1试剂

更新时间:2024-06-12

产品特点:
Polysciences 24765-1试剂,细胞转染在基因表达和蛋白质研究领域至关重要。Polysciences 24765-1,作为一种有效的转染试剂,能够高效地将DNA引入细胞内。本文将详细介绍Polysciences 24765-1的使用方法。
产品介绍
品牌 其他品牌 产地 进口
加工定制

一、贴壁细胞转染:Polysciences 24765-1试剂

以293T细胞为例,需要精确控制转染条件以确保*高效率。以下是具体步骤:

细胞准备:

使用胶原酶处理细胞并计数。在6孔板中以每孔2×106细胞接种。每孔加入2 mL新鲜的DMEM/F12+5%FBS 培养基和1 mL的细胞悬液,置于37℃,5%CO2培养箱培养24 h。24 h后,移除之前培养基,每孔加入2 mL新鲜的DMEM/F12+5%FBS。

转染过程:

1.检查细胞汇合度,达到70%-80%时开始转染。

2.分别用两份100 µL无血清培养基稀释DNA,使DNA终浓度为1 µg/ml(DNA/总培养体积)和适当比例的适量Polysciences 24765-1。DNA:PEI 的比例要依据自己实验摸索最适比例。

3.将稀释的Polysciences 24765-1转染试剂与质粒(总体积200 µL)轻轻混匀,室温孵育30 分钟。

4.PEI-DNA 复合物滴加到细胞培养板每个孔中,轻摇混匀。注意轻轻沿着孔板边缘滴入,以免破坏细胞的粘附性。

5.将培养板放入37℃,5%CO2培养箱培养中培养24 h。

结果观察:

在24小时后使用荧光显微镜观察转染效果,超过80%的293T 细胞在转染后的24 h可以观察到绿色荧光。

二、悬浮细胞转染:Polysciences 24765-1试剂

悬浮细胞转染步骤略有不同,小规模转染时,用新鲜的培养基重悬浮,使细胞密度达到 1×106cells/mL,如需大规模转染细胞密度要到达2-3×106cellsml/mL。

以293F细胞为例:

细胞准备:

传代接种于20 mL 悬浮细胞生长培养基中(36.5℃,120 rpm,5%CO2 )培养细胞至1×106 cells/mL的密度,旋紧瓶口放入摇床,2~4 小时后可以进行转染。

转染过程:

1.用1 mL无血清培养基稀释适量的DNA,使DNA 终浓度为1 µg/ml,混匀并静置5 min。

2.用1 mLOptiPRO

SFM(无血清培养基)稀释适当比例的PEI 40000,混匀并静置10 min。

3.将稀释的24765-1转染试剂与质粒轻轻混匀,室温孵育30分钟。

4.将PEI-DNA 转染复合物逐滴加入到细胞培养液中,摇匀后旋紧瓶口放回摇床(36.5℃,5%CO2,120 rpm)。

5.基因表达可在24-72小时后检测,时间取决于细胞系和转基因。



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